Главная страница
Финансы
Экономика
Математика
Начальные классы
Информатика
Биология
Медицина
Сельское хозяйство
Ветеринария
Вычислительная техника
Дошкольное образование
Логика
Этика
Религия
Философия
Воспитательная работа
История
Физика
Политология
Социология
Языкознание
Языки
Право
Юриспруденция
Русский язык и литература
Строительство
Промышленность
Энергетика
Другое
Доп
образование
Связь
Электротехника
Автоматика
Физкультура
Технология
Классному руководителю
Химия
Геология
Иностранные языки
Логопедия
Искусство
Экология
Культура
География
ИЗО, МХК
Казахский язык и лит
Директору, завучу
Школьному психологу
Обществознание
Социальному педагогу
Языки народов РФ
ОБЖ
Музыка
Механика
Украинский язык
Астрономия
Психология

ОТчет по практике 1 курс. Отчет по учебной практике Студента группы хтб 10 Кукшинова Виктора Зав кафедрой


Скачать 132.95 Kb.
НазваниеОтчет по учебной практике Студента группы хтб 10 Кукшинова Виктора Зав кафедрой
АнкорОТчет по практике 1 курс.docx
Дата08.07.2018
Размер132.95 Kb.
Формат файлаdocx
Имя файлаОТчет по практике 1 курс.docx
ТипОтчет
#19506


Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение профессионального высшего образования

Пермский государственный технический университет

Кафедра «химия и биотехнология»


Отчет по учебной практике

Студента группы ХТБ – 10

Кукшинова Виктора

Зав. кафедрой

д-р хим. наук, профессор

Вольхин В.В.

Руководитель практики

канд. биол. наук

___________ Виноградова А.В,
Пермь 2011

Содержание

1. Введение

2. Химический анализ воды

2.1

2.2

2.3

2.4

3. Микробиологический анализ воды

4. Результаты исследования

5. Вывод


  1. Ведение

Вода - одно из самых важных для человека веществ. Его организм, ткани тела больше чем наполовину состоят из воды.

Общее количество воды на Земле не меняется. С поверхности морей и океанов, рек и озёр вода испаряется, а затем возвращается на Землю в виде дождя.

Основным источником обеспечения пресной водой являются реки и озера, запасы воды в которых не превышают 95000 км^3, т. е. составляют всего 0,007 % от общих запасов воды на Земле. Помимо этого, пресная вода существует в реках, ручьях, пресных озёрах, а также в облаках.

Вода - ценнейший природный ресурс. Наряду с огромным значением воды в осуществлении всех жизненных процессов организмов, её ресурсы широко используется для гидроэнергетики, лесосплава, работы промышленных предприятий. Она также является приемником и структурой для преобразования и обеззараживания стоков населённых пунктов, промышленности, сельского хозяйства. Со сточными водами предприятий в реки и озера попадают различные ядовитые вещества. В России создалась довольно сложная ситуация. Качество вод большинства поверхностных водоемов страны не отвечает установленным нормативам. Главными загрязняющими поверхностные воды веществами являются нефтепродукты, фенолы, соединения меди и цинка, аммонийный и нитратный азот. При избыточном поступлении стоков с повышенной концентрацией вредных веществ нарушается качество воды и она становится мало пригодной, и в некоторых случаях непригодной для выполнения биологических функций организмов. В такой воде вода гибнет

Комплексонометрическое определение общей жесткости

Принцип метода

Метод основан на способности комплексона III образовывать с ионами кальция и магния в щелочной среде малодиссоциированные комплексы.

При титровании вначале с комплексоном связываются ионы кальция, а затем магния. При введении в исследуемую среду индикатора эриохром черного Т, он образует с ионами магния красно-фиолетовое комплексное соединение. При последующем титровании комплексоном последний, соединяясь с ионами кальция и затем с ионами магния, вытесняет индикатор, который в свободной форме имеет сине-голубую окраску. Для получения воспроизводимых результатов необходимо, чтобы титруемый раствор имел рН=10+0,2 и достаточное количество ионов магния.

Реактивы

1. Аммиачный буферный раствор (рН=10). Растворяют 20 г хлорида аммония в дистиллированной воде, добавляют 100 мл концентрированного раствора аммиака и доводят в мерной колбе до 1 литра дистиллированной водой.

2. Сульфид натрия, сухой (Na2S х Н2О).

3. Индикатор. Тщательно растирают 0,5 г индикатора (эриохром черный Т или кислотный хромтемносиний) в фарфоровой ступке с 50 г хлорида натрия.

4. Комплексон III, 0,05Н раствор. 1 фиксанал растворяют в мерной колбе на 2 литра дистиллированной водой.

Ход определения

К 100 мл профильтрованной исследуемой воды добавляют 5 мл аммиачного буферного раствора, примерно 100 мг индикатора и медленно титруют раствором комплексона при энергичном перемешивании до перехода красно-фиолетовой окраски в сине-голубую. Реакция в точке эквивалентности протекает несколько замедленно, поэтому в конце титрования раствор следует энергично перемешивать. При прибавлении избытка комплексона окраска больше не меняется, поэтому в качестве эталона может служить перетитрованная проба.

Если отсутствует резкий переход окраски в точке эквивалентности, в пробу перед внесением индикатора добавляют несколько кристаллов сульфида натрия.

Расчет

Общую жесткость воды (Х) в мг-экв/л рассчитывают по формуле:
α х Н х 1000

Х = V
где α – объем раствора комплексона, израсходованного на титрование, мл

Н – нормальность раствора комплексона

V – объем исследуемой воды, мл
Округление результатов

Диапазон, мг-экв/л Округление, мг-экв.

0,50 – 2,00 0,01

2,00 – 50,00 0,1

Аргентометрическое определение хлоридов

ПРИНЦИП МЕТОДА

Метод основан на малой растворимости хлорида серебра, количественно образующегося при титровании исследуемого раствора нитратом серебра

Ag+ + Cl- → AgCl↓

После полного осаждения хлоридов первая избыточная капля нитрата серебра вступает в реакцию с хроматом калия, образуя осадок хромата серебра, окрашенный в красный цвет

2 Ag+ + CrO42- → Ag2CrO4

ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

Минимальная определяемая концентрация 20 мгCl-/л, более надежные результаты метод дает при содержании хлоридов выше 40 мг/л. Относительное стандартное отклонение для концентрации 20 мгCl-/л составляет 4% (n=10), для концентраций 100-2000 мгCl-/л – не превышает 1% (n=10). Продолжительность определения единичной пробы 30 мин.

МЕШАЮЩИЕ ВЛИЯНИЯ

Определению мешают восстановители: сероводород, бромиды, йодиды. Влияние сероводорода устраняется подкислением пробы 0,1Н раствором азотной кислоты по лакмусовой бумаге и продувкой воздуха в течении нескольких минут. При наличии йодидов и бромидов метод дает суммарное содержание хлорид-йодид-бромид-ионов. При кислой реакции воды (рН<6,5) или щелочной (рН>7) в пробу вносят соответствующее количество 0,1Н раствора щелочи или кислоты до нейтральной реакции среды.

РЕАКТИВЫ

1. Хромат калия. Растворяют 5 г хромата калия, х.ч., в 95 мл дистиллированной воды.

2. Нитрат серебра, 0,05Н раствор. Растворяют 8,5 г нитрата серебра, ч.д.а. или ч., в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1 л.

ХОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Отбирают в коническую колбу на 250 мл такой объем исследуемой воды, чтобы на определение расходовалось 5-10 мл раствора нитрата серебра, доводят объем раствора до 100 мл дистиллированной водой, прибавляют 1 мл раствора хромата калия и титруют раствором нитрата серебра до неисчезающей при перемешивании оранжевой окраски осадка.

РАСЧЕТ

Содержание хлорид-ионов (Х) в мг/л рассчитывают по формуле:

α х Н х 35,45 х 1000

Х = V
где α - объем раствора нитрата серебра, израсходованного

на титрование, мл;

Н - нормальность раствора нитрата серебра;

35,45 - эквивалентный вес хлорид-иона;

V - объем исследуемой воды, мл.

ОКРУГЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Диапазон, мг/л Округление, мг

20,0 – 50,0 0,1

50,0 - 2000,0 1


ЖЕЛЕЗО В ВОДЕ.

Железо (III) в сточных водах представлено сульфатными, железо (II) – сульфатными и бикарбонатными солями.

Для кислых сточных вод рекомендуется комплексонометрический метод последовательного определения ионов железа (III, II) и алюминия из одного объема пробы воды.

Если к выполнению определения нельзя приступить сразу после отбора проб и их транспортировка занимает несколько часов, пробы консервируют. В зависимости от цели анализа консервируют профильтрованные и нефильтрованные пробы.

Фильтрование проводят через фильтр «синяя лента». При консервации на 1 литр пробы прибавляют 5 мл концентрированной серной кислоты и 1,0-1,5 г сульфата аммония.

КОМПЛЕКСОНОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖЕЛЕЗА (II, III).

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Метод основан на образовании в кислой среде прочных комплексов ионов железа (III, II) с комплексоном III. В качестве индикаторов используют салициловую или сульфосалициловую кислоту и ее натриевую соль. Образование комплексов железа (III) с комплексоном зависит от температуры растворов, рН среды. Оптимальные условия проведения реакций предусмотрены в ходе определения.

ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА:

Минимальная определяемая концентрация ионов железа (III) или (II) 10 мг/л. Относительное стандартное отклонение для всего диапазона концентраций не превышает 2% (n = 10).

Время определения железа (III,II) и алюминия в единичной пробе 1 ч.

МЕШАЮЩИЕ ВЛИЯНИЯ:

Определению не мешают содержащиеся в сточных водах катионы и анионы.

ПРИБОРЫ И РЕАКТИВЫ:

1. Лабораторный рН-метр.

2. Магнитная мешалка.

3. Комплексон III, 0,025М раствор. Готовят из фиксанала, растворяя навеску фиксанала в 2 л дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки.

4. Персульфат аммония или калия, х.ч., сухой.

5. Соляная кислота, (пл. 1,19), х.ч., разбавленная (1 : 1).

6. Сульфосалициловая кислота или сульфосалицилат натрия, сухие или их водные растворы, 10 г реактива растворяют в 90 мл дистиллированной воды. Салициловая кислота. 10 г кислоты растворяют в 100 мл этилового спирта.

7. Аммиак, ч.д.а., разбавленный (1 : 3).

ХОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖЕЛЕЗА (III).

В химический стакан вместимостью 150 мл отбирают в зависимости от содержания железа 10-100 мл исследуемой пробы ( если предполагаемое содержание железа (III) составляет 100-200 мг/л, отбирают 100 мл пробы, при 800-1000 мг/л - 10-20 мл), прибавляют при малом объеме пробы дистиллированной воды до объема 70-80 мл и под контролем рН-метра раствором соляной кислоты доводят рН до 1.

Если проба была законсервирована и ее рН<1, прибавляют раствор аммиака до рН=1.

Пробу из стакана переносят в термостойкую коническую колбу вместимостью 250мл, промывая дистиллированной водой стакан и электроды так, чтобы объем раствора в колбе был равен

100 мл. К раствору прибавляют 1 мл раствора салициловой или сульфосалициловой кислоты, помещают в колбу термометр и нагревают на электроплитке до 60-70оС. Нагретую пробу титруют раствором комплексона III до исчезновения лилово-фиолетовой окраски. Проба становится бесцветной при малом содержании железа или приобретает при более высоких концентрациях железа лимонно-желтую окраску, интенсивность второй усиливается с повышением концентрации железа (III).
РАСЧЕТ :

Содержание железа III (Х) в мг/л рассчитывают по формуле:

а х Н х 55,85 х 1000 , мг/л

Х = 2 х V

где а - объем раствора комплексона III, израсходованного на

титрование, мл;

Н – нормальность раствора комплексона III;

V – объем исследуемой воды, мл;

55,85 – масса атома железа.


ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖЕЛЕЗА (II).

Раствор, в котором оттитрованы ионы железа (III), вновь нагревают, если он охладился до 60-70оС и прибавляют на кончике шпателя несколько кристалликов персульфата аммония. При этом железо (II) окисляется до железа (III), и раствор вновь окрашивается в лилово-фиолетовый цвет. Титруют раствором комплексона (III) до исчезновения лилово-фиолетовой окраски. После окончания титрования обязательно прибавляют 2-3 кристаллика персульфата аммония, чтобы убедиться в полном окислении железа (II). При значительном содержании железа (II) может быть так, что персульфат аммония потребуется добавить в процессе титрования несколько раз. Но всегда следует помнить, что избыточный персульфат будет помехой для дальнейшего определения ионов алюминия.
РАСЧЕТ:

Содержание железа (II) в мг/л рассчитывают по формуле для расчета железа (III).

ОКРУГЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Диапазон, мг/л Округление, мг

10,0 – 100,0 0,1

100 - 1000 1

ТИТРИМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СУЛЬФАТОВ СОЛЬЮ

БАРИЯ В ПРИСУТСТВИИ НИТХРОМАЗО.

ПРИНЦИП МЕТОДА

Метод основан на способности сульфат-ионов, образовывать слаборастворимый осадок BaSO4 при взаимодействии их с солями бария. Нитхромазо взаимодействует с барием в кислой среде (рН=1,7-2,0), давая контрастную реакцию и четкий переход окраски из фиолетовой в голубую. Для повышения чувствительности реакции титрование проводят в водноацетоновой или водноспиртовой среде.

ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

Минимальная определяемая концентрация 1 мг SO42- в исследуемом объеме пробы. Относительное стандартное отклонение при концентрациях от 100 до 500 мг/л SO42- равно 2%, при концентрациях от 500 до 2000 мг/л – 1% (n=10). Продолжительность определения единичной пробы 30 мин.

РЕАКТИВЫ

1. Хлорид бария, 0.1 н раствор. 0,1 н раствор хлорида бария готовят из фиксанала.

Раствор 0,02 н готовят разбавлением основного раствора в 5 раз.

2. Нитхромазо, 0,2%-ный раствор. Растворяют 0,2 г индикатора в 100 мл дистиллированной воды. Раствор устойчив длительной время.

3. Аммиак, х.ч., разбавленный (1:2).

4. Соляная кислота, х.ч., разбавленная (1:3).

5. Ацетон, х.ч., или спирт этиловый 96%.

Ход определения.

Фильтруют пробу воды и отбирают 10 мл в коническую колбу вместимостью 50 мл, доводят рН раствора до 2 (по индикаторной бумаге) аммиаком или соляной кислотой, добавляют 10 мл ацетона или спирта, 2-3 капли раствора нитхромазо и титруют медленно по каплям 0,1 Н раствором BaCl2 при энергичном перемешивании до переходя окраски из фиолетовой в сине-голубую , не исчезающую при стоянии в течении 3 мин. В конце титрования хлорид бария следует прибавлять по одной капле, интенсивно перемешивая смесь до тех пор, пока перестанет возвращаться фиолетовая окраска. Если на титрование идет меньше 1 мл хлорида бария, применяют 0,02Н раствор.

Расчет:

Содержание сульфат-ионов (Х) в мг/л рассчитывают по формуле
α х Н х 48,03 х 1000

Х= V
где α - объем раствора хлорида бария, израсходованного на

титрование, мл;

Н - нормальность титрованного раствора хлорида бария;

V - объем пробы ,взятый для титрования, мл;

48,03 - эквивалент SO42-

Фотоколориметрическое определение меди

с диэтилдитиокарбаматом натрия

1. Сущность метода

Метод основан на взаимодействии ионов двухвалентной меди с диэтилдитиокарбаматом натрия в слабощелочном растворе с образованием диэтилдитиокарбамата меди, окрашенного в желто-коричневый цвет. В разбавленных растворах диэтилдитиокарбамат меди образует коллоидные растворы, для дальнейшей устойчивости которых добавляют раствор крахмала. Для устранения мешающего влияния железа и жесткости волы добавляют раствор сегнетовой соли.

2.Аппаратура, материалы и реактивы

Фотоэлектроколориметр различных марок

Кюветы с толщиной слоя 50 мм

Посуда мерная лабораторная, стеклянная по ГОСТ 20292-74, вместимостью : пипетки мерные 1-2 мл с делениями 0,01 мл и 5 мл с делениями 0,1 мл.

Колбы мерные на 50 мл

Стаканы стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82

Аммиак водный по ГОСТ 3760-79, 25%-ный раствор

Калий-натрий виннокислый С4Н4О6КNa х 4Н2О (сегнетова соль)

по ГОСТ 5845-79

Медь сернокислая по ГОСТ 4165-78

Натрия Н,Н-диэтилдитиокарбамат по ГОСТ 8864-71

Кислота соляная по ГОСТ 3118-77

Кислота серная по ГОСТ 4204-77

Крахмал растворимый по ГОСТ 10163-76, 0,5 %-ный раствор

Все реактивы, используемые для анализа, должны быть квалификации чистые для анализа (ч.д.а.).

3.Подготовка к анализу

3.1. Вода дистиллированная, не содержащая меди, используется для приготовления растворов

3.2. Приготовление 0,1%-ного раствора диэтилдитиокарбамата натрия:

1 г диэтилдитиокарбамата натрия растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, фильтруют и доводят объем раствора до 1 л дистиллированной водой. Хранят в склянке из темного стекла в темном месте.

3.3. Приготовление водного раствора аммиака:

Раствор готовят разбавлением 25%-ного раствора аммиака дистиллированной водой в соотношении 1 : 4.

3.4. Приготовление калия-натрия виннокислого (сегнетовой соли):

30 г сегнетовой соли растворяют в 70 мл дистиллированной воды (30%-ный раствор).

3.5. Приготовление основного стандартного раствора сернокислой меди (CuSO4 × 5 H2O):

0,393 г сернокислой меди растворяют в мерной колбе вместимостью 1л в небольшом количестве дистиллированной воды, подкисляют 1 мл серной кислоты, разбавленной 1:5, доводят до метки дистиллированной водой. 1 мл раствора содержит 0,1 мг меди.

Срок хранения раствора – 3 месяца.

3.6. Приготовление рабочего стандартного раствора сернокислой меди:

Рабочий раствор готовят разбавлением основного раствора в 10 раз дистиллированной водой. 1 мл раствора содержит 0,01 мг меди.

4. Построение калибровочного графика

В серию мерных колб вместимостью 50 мл отбирают 0,0; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 мл рабочего стандартного раствора (массовая концентрация меди соответственно будет равна 0,0; 0,001; 0,002; 0,005; 0,01; 0.02; 0,03 мг). Подкисляют 1-2 каплями соляной кислоты, разбавленной 1 : 1, затем последовательно прибавляют 1 мл сегнетовой соли, 5 мл раствора аммиака,

1 мл крахмала и 5 мл раствора диэтилдитиокарбамата натрия. После добавления каждого реактива производят перемешивание.

При фотометрическом колориметрировании используют синий светофильтр ( длина волны - 440 нм) и кювету с толщиной слоя 50 мм. Замеряют оптическую плотность исследуемой пробы в сравнении с холостой ( первая мерная колба без рабочего стандартного раствора, но со всеми внесенными реактивами).

Строят калибровочный график зависимости оптической плотности от концентрации меди, откладывая на оси абсцисс концентрацию меди, а на оси ординат – оптическую плотность.

5. Обработка результатов:

Массовую концентрацию меди рассчитывают по формуле:
C х 1000

Х = --------------------- мг/л, где

V

С - концентрации меди, найденная по калибровочному графику, мг
V – объем пробы, взятый для анализа, мл
1000 - пересчет на 1л

Определение химически потребляемого кислорода (ХПК) бихроматным методом.

Метод предназначен для определения количества кислорода, которое нужно потребить на окисление органических и неорганических веществ, присутствующих в анализируемой среде.

Аппаратура

  1. Колба Эрленмейера (коническая) емкостью 100 мл, 2 шт.

  1. Пипетка емк. 5 мл (2 шт.), 10 мл (2 шт.), 15, 20 мл

3. Весы аналитические

4. Электроплитка

5. Штатив металлический с бюреткой

Реактивы и их приготовление

  1. Калий двухромовокислый 0,25 н. раствор (12,25г реактива растворить в 1 л дист.воды в мерной колбе).

  2. Сернокислое серебро.

  1. Кислота серная концентрированная.

  2. Дистиллированная вода.

  3. Соль Мора 0,25 н. раствор.
    Приготовление: в 250 мл дистиллированной воды растворяют 49,0 г реактива, прибавляют 10 мл концентрированной серной кислоты, охлаждают и объем раствора доводят до 500 мл в мерной колбе.

6. Индикатор — кислота н-фенилантраниловая.
Приготовление: 0,25 г кислоты растворяют в 12 мл О.1 н. раствора едкого натра и разбавляют водой до 250 мл.

Ход анализа

Для определения берут 10 мл пробы, проба не разбавляется, если ХПК не превышает 500 мг/л.

В колбу Эрленмейера емкостью 100 мл наливают 10 мл пробы, добавляют 5 мл 0,25 н. раствора бихромата калия и 0,1—0,2 г сернокислого серебра (в качестве катализатора).

Из пипетки при непрерывном перемешивании добавляют 15 мл концентрированной Н24. Сразу же после этого колбу ставят на плитку и кипятят (60± 1) секунд (с момента появления первых пузырьков).

После кипячения колбу охлаждают на воздухе 5 минут, добавляют пипеткой 20 мл дистиллированной воды и охлаждают под водой до (40±0,5)°С. Затем оттитровывают неизрасходованный на реакцию бихромат калия 0,25 н. раствором соли Мора с индикатором — фенилантраниловой кислотой.

Одновременно делают холостой опыт с 10 мл дистиллированной воды.
Расчет ХПК

, мг О2/л,

где: а— объем раствора соли Мора, пошедшего на титрование холостой пробы, мл;

в — объем раствора соли Мора, пошедшего на титрование исследуемой пробы, мл;

N — нормальность раствора соли Мора;

V — объем пробы, взятой на анализ, мл;

8 — эквивалент кислорода, мг;

К — поправочный коэффициент к нормальности раствора соли Мора (1,012);

n —разведение.
Допустимые расхождения между двумя параллельными определениями не должны превышать ±0,5% отн.


Методы микробиологии

Метод высева на плотные среды (метод Коха)

Сущность метода заключается в высеве определенного объема исследуемой суспензии на плотную среду в чашку Петри и последующем подсчёте выросших колоний. При этом считают, что каждая колония является результатом размножения одной клетки.

Чашечный метод широко используется для определения количества жизнеспособных микроорганизмов в почве и других естественных субстратах. Он позволяет учесть не только численность микроорганизмов в субстрате, но и оценить их разнообразие по морфологии колоний. Следует помнить, что результаты определения этим способом численности микроорганизмов, образующих щепочки или другие скопления клеток, будут всегда несколько занижены.
Приготовление разведений

Разведение делают в стерильном 0,5%-ном вводом растворе NaCl. Готовят определенный объем этого раствора и стерилизуют его при 1 атм. В ходе одного опыта пользуется постоянным коэффициентом разведения, так как в этом случае уменьшается вероятность ошибки. Чаще всего делают десятичные разведения. Для этого стерильный раствор NaCl разливают стерильной пипеткой по 9 мл в стерильные сухие пробирки. Затем переносят стерильной пипеткой 1 мл исследуемого материала в пробирку с 9 мл стерильного раствора NaCl. Суспензию этого разведения тщательно перемешивают с помощью новой стерильной пипетки, вбирая в пипетку и выпуская из нее полученную взвесь. Затем этой же пипеткой берут 1 мл полученного разведения и переносят его во вторую пробирку. Степень разведения определяется предполагаемым количеством микроорганизмов в образце и соответственно число разведении тем больше, чем больше микроорганизмов в исходном субстрате. Для приготовления каждого разведения обязательно используют отдельную пипетку. Пренебрежение этим правилом может привести к получению ошибочного результата, иногда в 100 и более раз превышающего истинный.

1 001.jpg

Посев на агаризованные среды в Чашки Петри

В стерильные чашки Петри разливают расплавленную на кипящей водяной бане агаризованную среду, по 20-30 мл в каждую. Чашки оставляют на горизонтальной поверхности, пока не застынет агар. Затем их в большинстве случаев выдерживают 2-3 суток при 300 крышками вниз для подсыхания поверхности среды и проверки её стерильности. Для посева отбирают чашки, среда в которых осталась стерильной. Посев делают из определённых разведений в зависимости от предполагаемого количества микроорганизмов в исследуемом субстрате. Стерильной пипеткой наносят определённый объем (обычно 0,05, 0,1 или 0,2 мл) соответствующего разведения, предварительно тщательно перемешанного, на поверхность агаровой пластинки в чашки Петри. Этот объем распределяют по поверхности среды стерильным шпателем. Затем эти же шпателям проводят по всей поверхности во второй чашке. Куда посевной материал не вносили. Из каждого разведения делают, таким образом, 4-6 параллельных высевов. Для параллельных рассевов из одного разведения можно пользоваться одной стерильной пипеткой и одним шпателем. Для посевов из разных разведений используют новую стерильную пипетку и новый шпатель. Чашки с засеянными средами помещают в термостат, отрегулированный на определенную температуру, благоприятную для развития выявляемых микроорганизмов.

Подсчет выросших колоний

Подсчет выросших колоний проводят через определенное время после посева, которое зависит от скорости роста выявляемых микроорганизмов на используемой в опыте среде и при данной температуре. Подсчитывают количество колоний, выросших при высеве из этого разведения. Колонии, как правило, считают, не открывая чашки Петри. Для удобства отмечают просчитанную колонию точкой на наружной стороне дна чашки, пользуясь чернилами по стеклу. При большом количестве колоний дно чашки делят на секторы, подсчитывают количество колоний в каждом секторе и результаты суммируют или используют полуавтоматические счётчики. Лучшим разведением считают то, при высеве из которого на плотной питательной среде вырастает от 50 до 150 колоний. Если число выросших колоний меньше 10, то эти результаты отбрасывают и для расчётов количества клеток в исходном субстрате не используют. Желательно, чтобы общее количество подсчитанных колоний при высеве из данного разведения было не менее 300.

Определение количества микроорганизмов в 1 мл исходного субстрата. Наиболее вероятно количество микроорганизмов, содержащееся в 1 мл исходного субстрата, при уровне достоверности 95% (Р0,95) вычисляют по формуле


- среднее число колоний, выросшее при высеве из данного разведения;

- среднее квадратичное отклонение;

2 – t-критерий при Р0,95;

К- разведение из которого проведен высев;

V- объём суспензии, взятый для посева, мл;

общее количество подсчитанных колоний при высеве данного разведения;

n- число повторностей.

Если уровень достоверности 99% , то t-критерий соответствует 2,7, поэтому формула для Р0,95 имеет следующий вид:

;

Статистическая обработка результатов возможна только при минимальной технической ошибке. Чашечный метод требует большой чистоты и аккуратности при выполнении всех операций. Необходимо тщательно оберегать пипетки и среды от заражения посторонними микроорганизмами, так как каждая случайно попавшая клетка может завысить число микроорганизмов в исследуемой суспензии. Поэтому приготовление разведений и высевы лучше проводить в боксе.


написать администратору сайта